Tartalomjegyzék
Epe hatása a lipáz enzimaktivitására
Lipidemésztés, a lipáz-aktivitás mérése
- Az élőlényekben a glicerinészter-hidrolázok (lipázok) hasítják a neutrális zsírokat glicerinre és zsírsavakra.
- triglicerid + H2O → diglicerid + zsírsav
pancreas-lipáz
- emberben a legfontosabb enzim a lipidek emésztésében
- a pancreas termeli
- a duodenumba jutva a trigliceridekből zsírsavakat szabadít föl.
- aktív lúgos, neutrális és savas közegben is.
- működését az epesavak segítik elő.
epesavak
- amfipatikusak → emulgeálják a zsírokat
- a lipázt direkt aktiválják → ez a hatás vizsgálható tejben (ahol a zsírok eleve finom emulzió formájában találhatók)
a gyakorlat
- a lipáz aktivitását a fölszabaduló zsírsavak (gyenge savak) fenolftalein(savas: színtelen, lúgos: piros) indikátor melletti titrálásán keresztül vizsgáljuk.
anyagok
- tej (2,8% zsírtartalom) (pH=7,2)
- 10%-os formaldehid oldat
- lipáz oldat
- fenolftalein
- epe
- 0,1 N NaOH oldat
Hagedorn-csövekben készítsük össze az alábbi rendszereket
| anyagok | 1. rendszer | 2. rendszer |
| tej(ml) | 50 | 50 |
| epe (ml) | - | 2 |
| desztillált víz (ml) | 2 | - |
| lipáz (ml) | 2 | 2 |
- az inkubációt (37 oC-on a lipáz hozzáadásával indítjuk.
- Az inkubálás 0., 10., 20., és 40. percében mindegyik Hagedorn-csőből 10-10 ml mintát veszünk
- ezeket Erlenmeyer-lombikba pipettázunk 10 ml formaldehidet és 2-3 csepp fenolftaleint adunk hozzájuk
- ezt követően ezen oldatokat 0,1 N Na-hidroxiddal megtitráljuk.
- A titráláshoz fogyott NaOH mennyiségét koordináta rendszerben ábrázoljuk az inkubációs idő függvényében.
